原代細胞的分離培養：
原代培養即直接從有機體取下細胞、組織或器官，讓它們在體外維持與生長。原代培養的特點是細胞或組織剛離開機體，它們的生物性狀尚未發生很大的改變，在一定程度上可反映它們在體內的狀態，表現出來源組織或細胞的特性， 因此用于藥物實驗，尤其是藥物對細胞活動、結構、代謝、有無毒性或殺傷作用等，是的工具。常用的原代培養法有組織塊培養法和消化培養法。
（一）組織塊培養法
許多實驗室喜歡用組織塊培養法進行原代培養，因為方法簡單，細胞也較容易生長。尤其是培養心肌，有時還可觀察到心肌組織塊搏動。細胞從組織塊邊緣向外長出并鋪滿培養皿或培養瓶后， 即可進行傳代。
1. 設備材料
培養箱、冰箱、超凈工作臺／無菌間、無菌吸管、離心管、酒精燈、試管架、培養瓶、培養皿、消化液、基礎培養液、胎牛血清、Hanks 溶液、雙抗試液、剪刀、攝子、小燒杯。
2. 操作步驟
（1） 在無菌條件下，取待培養的組織適量，置入小燒杯中， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉組織塊表面的血污。
（2）用眼科剪將組織塊反復剪成0.5~ 1mm3的小塊。
（3）再用Hanks 溶液反復漂洗， 直至液體不混濁為止。等組織塊下沉，將燒杯傾斜，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液。
（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml、200μg/ml）的培養液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養液。
（5）用彎頭吸管吸取組織小塊，均勻地置于培養皿內表面，吸去多余的培養液，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜。蓋好培養皿蓋，做好標記， 置37°C 的CO2培養箱內。
（6） 2~4h 后，于超凈工作臺中，緩緩地向培養皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養液少量，以使組織塊浸沒在培養液中。
（7）輕輕地將培養皿及組織塊移至CO2 培養箱， 如無特殊情況，不必觀察。1~2 周后，可觀察到細胞從組織塊邊緣長出，形成生長暈。
（9） 一般說來，若培養液無明顯改變， 1 周換液1 次即可。待細胞長滿整個培養皿內表面，即可進行傳代培養。
兔腦微血管內皮細胞
細胞基本屬性：
產品名稱 | 兔腦微血管內皮細胞 | 組織來源 | 腦動脈 |
種屬 | 兔 | 生長特性 | 貼壁生長 |
形態特征 | 內皮細胞樣 | 英文名稱 | 詳見說明 |
貨號 | EY-XY3905 | 規格 | 5x105cells/T25或1mL凍存管 |
質量檢測：血管假性血友病因子（vWF）免疫熒光染色為陽性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等
產品規格：5x105cells/T25或1mL凍存管
培養基：兔腦微血管內皮細胞培養基
培養條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
換液頻率：每2-3天換液一次
消化液：0.25%
產品貨期現貨，1周左右
運輸方式T25培養瓶/ 順豐快遞（包郵）
供應限制僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用
背景介紹：
腦微血管內皮細胞分離自腦組織；腦微血管內皮細胞是血腦屏障的主要組成成分，能夠限制可溶性物質和細胞等從血液進入大腦。大腦微血管內皮細胞與外周內皮細胞相比具有一些相同特性。腦微血管內皮細胞存在許多細胞間緊密連接，產生很高的跨內皮阻抗，延遲細胞旁的通量；腦微血管的內皮細胞間銜接得十分緊密，不象其他組織的血管內皮細胞那樣有較大的縫隙腦微血管內皮細胞缺乏內皮細胞的窗孔結構，其液相物質胞飲水平較低；腦微血管內皮細胞具有不對稱定位酶和載體介導轉運系統，從而產生 “兩極分化”的表現型。 |
公司正在出售的產品：
小鼠γ-基(γABA)ELISA試劑盒 ，英文名： γABA ELISA Kit
人網膜素(omein)ELISA檢測試劑盒HumanomeinELISAKit 96T/48T
大鼠堿性成纖維細胞生長因子4(bFGF-4)免疫試劑盒 Rat fibroblast growth factor 4,FGF4 ELISA Kit
英文名稱RatFLT3ELISAKIT大鼠FMS樣酪輔酶激酶3(FLT3)規格：96T/48T
抗體/蛋白HRP標記制備試劑盒5次
ELISAKitPTGDS人前列腺素D合成酶規格：48T/96T
豬雌激素(E)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human macrophage inflammatory protein 3 alpha (MIP-3 alpha /CCL20) ELISA Kit 人巨噬細胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA試劑盒
Porcinegasieceptor,GsaRELISAKit 豬促胃液素受體(GsaR)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforALP-B(MouseBone-specificAlkphaseB)ELISAKit小鼠骨特異性堿性0酸酶B規格：48T/96T
血液0酸二酯酶5(PDE5)活性酶連續循環定0比色法定量檢測試劑盒20次
Mouseα-Glucosidase,a-GluELISAKit小鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)ELISA試劑盒規格：96T/48T
兔腦微血管內皮細胞木聚糖酶測試盒 可見分光光度法 50管/24樣
酸性木聚糖酶測試盒 可見分光光度法 50管/24樣
堿性木聚糖酶測試盒 可見分光光度法 50管/24樣
β-木糖苷酶測試盒 可見分光光度法 50管/24樣
操作方法：
組織塊直接培養法（原代細胞培養實驗）
材料與儀器
【動物】選擇大約一半足孕時間的胚胎，10－13天齡胚胎含有最大數量的未分化的間質細胞，成纖維細胞可從這些細胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個【實驗材料】每組的超凈臺中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個；3、50ml離心筒2個4、滅菌培養皿1個，細胞培養瓶1個5、1ml，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個6、細胞計數板1塊；7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；8、酒精燈1臺；
步驟
1) 胚胎的分離。適用哺乳動物(倉鼠、小鼠和大鼠)2)將1－2個胚胎轉移至一個小的無菌培養皿中，用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎，用PBS漂洗。3)在無菌狀態下，將絞碎的胚胎轉移于一50ml的無菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無菌,用攪拌棒輕輕攪動。4)在溫暖的環境中或置于37°C培養箱中輕輕搖動15分鐘。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細胞的液體轉移至一無菌50ml的離心管中，該管內按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。6)加人新鮮溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中，重復步驟4和5。7)離心混合的細胞懸液，1200r/rain，5分鐘，棄上清。8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細胞，按步驟7再次離心。9)用PBS反復洗滌細胞直至上清清亮為止。
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